這是我們?nèi)糠窒盗嘘P(guān)于CO 2孵育的第三部分。
細(xì)菌（包括支原體），病毒和真菌對細(xì)胞培養(yǎng)物的污染，或甚**其它細(xì)胞系的交叉污染，可導(dǎo)致任何研究或制藥實(shí)驗(yàn)室的資源的顯著損失。減少生物污染風(fēng)險(xiǎn)的**有效方法是在使用細(xì)胞和試劑時(shí)正確使用無菌技術(shù)。基本的良好實(shí)驗(yàn)室操作也很重要，包括對設(shè)備，介質(zhì)和試劑進(jìn)行有效滅菌; 使用每個(gè)小區(qū)類型的專用介質(zhì); 戴手套和實(shí)驗(yàn)室外套; 并保持實(shí)驗(yàn)室無灰塵和雜物。CO2培養(yǎng)箱用于為細(xì)胞培養(yǎng)物繁殖提供理想的環(huán)境，也為微生物的生長提供了良好的環(huán)境，所以它必須被認(rèn)為特別值得注意。存在用于預(yù)防和消除CO2培養(yǎng)箱中的污染的不同方法。實(shí)驗(yàn)室的**佳選擇取決于您增長的細(xì)胞數(shù)量和類型，實(shí)驗(yàn)室中的人員數(shù)量，以及該方法的優(yōu)缺點(diǎn)如何適合您的工作流程。
防污染方法
幾乎不可能防止微生物每次打開門時(shí)進(jìn)入二氧化碳培養(yǎng)箱，除非實(shí)驗(yàn)室本身是潔凈室設(shè)施。微生物，主要是細(xì)菌，是我們不變的伴侶。它們在空氣中循環(huán)，覆蓋我們身體的每一部分。事實(shí)上，**近使用人體皮膚拭子的取樣回收了10,000個(gè)微生物/ cm 2。1我們不得不從我們的皮膚，頭發(fā)和呼吸中脫落細(xì)菌，并且它們落在培養(yǎng)皿上和培養(yǎng)箱中。
因此，近年來，二氧化碳培養(yǎng)箱制造商已經(jīng)引入了許多不同的選擇，以幫助防止不需要的微生物在培養(yǎng)箱內(nèi)的生長 - 甚**在它們進(jìn)入后。了解可用的方法將確保您選擇**適合您實(shí)驗(yàn)室的要求和工作環(huán)境的技術(shù)。
純銅觸摸表面
用于防止培養(yǎng)箱中的微生物生長的一種方法不需要實(shí)際操作時(shí)間或維護(hù)，并且?guī)浊昵埃杭児腆w銅。古代社會成功地使用銅作為皮膚疾病和傷口的局部治療。今天，銅在臨床科學(xué)*域得到了廣泛的重用，并且在2008年，美GEPA證明純銅“在兩小時(shí)內(nèi)殺死99.9％的細(xì)菌”。2銅甚**已被證明對細(xì)菌孢子有效。3
為了認(rèn)識到銅的有效抗菌活性，具有100％純固體銅內(nèi)室的孵化器已經(jīng)在細(xì)胞培養(yǎng)研究社區(qū)中發(fā)展了強(qiáng)烈??的追隨。在二氧化碳培養(yǎng)箱中使用銅甚**更有意義，理解為較高的溫度和較高的相對濕度增加了銅的抗微生物效力。4反映了對銅的興趣的增加，更多的制造商現(xiàn)在提供銅溶液的變化，包括鍍銅和與少量銅合金化的不銹鋼。然而，電鍍具有刮擦和剝離的傾向，留下未保護(hù)的表面，并且很清楚，合金必須含有非常高比例的銅 - 大于60％ - 以有效。5,6
什么機(jī)制銅殺死？詳情尚不清楚; 然而，我們知道銅離子破壞和損害微生物細(xì)胞膜，并進(jìn)入細(xì)胞或?qū)е录?xì)胞質(zhì)內(nèi)容物泄漏出來。活性氧造成進(jìn)一步的損傷，DNA被降解。4這是否意味著銅表面對于在二氧化碳培養(yǎng)箱中生長的培養(yǎng)細(xì)胞存在風(fēng)險(xiǎn)？沒有！銅離子不會成為空氣傳播，因此它們不會對培養(yǎng)的細(xì)胞造成危險(xiǎn)。銅只在接觸。
除了偶爾清洗外，固體銅孵化器室不需要維護(hù)，就像不銹鋼一樣。隨著時(shí)間的推移，銅將由于氧化而變色，這是好的。晦暗實(shí)際上提高了抗微生物功效。事實(shí)上，在對大腸桿菌的測試中，失去光澤的99％的銅在60分鐘內(nèi)殺死超過100,000個(gè)細(xì)菌。然后除去晦暗，再次測試銅。在這個(gè)60分鐘的測試中，未經(jīng)拋光的99％的銅，少于50個(gè)細(xì)菌被殺死。5不褪色的合金具有非常低的抗微生物功效（如果有的話）。
HEPA過濾器
高效微粒空氣（HEPA）過濾器通常用于許多應(yīng)用，包括保健和安全。它們捕獲空氣污染物，包括灰塵，過敏原和微生物，有些可以捕獲揮發(fā)性有機(jī)化學(xué)物質(zhì)。
HEPA過濾器由無規(guī)排列的硼硅酸鹽纖維制成。該過濾器通過三種不同的機(jī)制捕獲污染物：攔截和沖擊（其捕獲大于0.4μm的顆粒）和擴(kuò)散（其捕獲微小顆粒，特別是小于0.1μm的微小顆粒）。微小顆粒與布朗運(yùn)動中的空氣分子碰撞。碰撞減慢了顆粒的速度，并且它們變得卡在過濾器中。7因此，0.1和0.4微米之間的顆粒是**難捕捉。這就是為什么HEPA過濾器根據(jù)0.3μm的**大穿透粒徑評定，它們以**少99.97％的效率去除。8大于和小于0.3μm的顆粒實(shí)際上被更有效地捕獲。
眾所周知用于生物安全柜，HEPA過濾是理想的用于二氧化碳培養(yǎng)箱內(nèi)，以保護(hù)培養(yǎng)細(xì)胞免受通過培養(yǎng)箱門進(jìn)入的空氣污染物。HEPA過濾器通常便宜且易于更換，并且持續(xù)六個(gè)月**一年。一些孵化器提供方便的報(bào)警，以提醒您更換過濾器。污染的過濾器可以在處理前簡單地用其他實(shí)驗(yàn)室廢物進(jìn)行高壓滅菌。當(dāng)評估具有HEPA選項(xiàng)的孵化器時(shí)，確保HEPA過濾器滿足捕獲99.99％的顆粒的要求。過濾器越快地循環(huán)通過腔室中的整個(gè)空氣體積，并且在門打開之后恢復(fù)條件，其保護(hù)值越大。
消除污染的方法
定期地，細(xì)胞培養(yǎng)箱應(yīng)該被清潔和凈化以完全消除所有微生物生命。這需要去除所有的培養(yǎng)物，通常每周**每兩個(gè)月進(jìn)行一次。一些CO2培養(yǎng)箱提供自動化方法來執(zhí)行該任務(wù)。這些自動化系統(tǒng)的巨大優(yōu)點(diǎn)是它們通過消除對單獨(dú)高壓滅菌的可移除部件或使用殺菌清潔器的需要來簡化清潔單元。
高溫去污
許多直接熱培養(yǎng)箱現(xiàn)在提供了一個(gè)運(yùn)行一夜的高熱凈化循環(huán)。這些過程旨在消除移除，單獨(dú)的高壓滅菌，以及重新組裝貨架和其他培養(yǎng)箱部件的需要。
然而，重要的是要準(zhǔn)確地詢問準(zhǔn)備所提供的去污循環(huán)所需要的。不是所有的孵化器都使用與這些高溫兼容的CO 2，濕度和氧傳感器，因此這些傳感器必須在程序之前移除并且之后更換，這需要時(shí)間，并且還存在重新引入污染的風(fēng)險(xiǎn)。
比較不同制造商的方法可能令人困惑，因?yàn)闇囟确秶鷱?0℃的濕熱到180℃的干熱，并且沒有空腔滅菌的ISO指南。因此，評估不同孵化器的**佳方法是尋找由獨(dú)立測試實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)生的顯示測試生物體消除的數(shù)據(jù)。
紫外光
紫外線（UV）光是用于細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室中使用的生物安全柜的消毒的公知程序。在一些二氧化碳培養(yǎng)箱中偶爾提供紫外光作為去污機(jī)制。然而，美GCDC，NIH和NSF不再推薦UV作為**的消毒方法。8有幾個(gè)方面的原因。通常認(rèn)為燈泡的清潔度，溫度和尺寸將影響UV光輸出，因此特定燈泡可能不提供所公布的殺菌活性的量。這與在高濕度水平下操作的二氧化碳培養(yǎng)箱特別相關(guān)，因?yàn)閁V光的殺菌效果隨著相對濕度高于70％而急劇下降。9另外，殺菌燈的任何UV燈發(fā)出的光量與燈泡的年齡降低，所以很難以確定它是否已經(jīng)真正有效。8
一篇文章顯示在空的孵化器中的24小時(shí)UV去污，其在消除細(xì)菌和真菌中與高熱去污一樣有效; 然而，根據(jù)制造商的說明，UV循環(huán)必須立即用70％異丙醇完全清潔室，其本身將消除這些生物體。因此，難以確定微生物生命的消除是由于UV還是由于酒精消毒。使用UV的另一個(gè)問題是任何阻擋光（包括灰塵顆粒，架子和空氣管道）的東西都阻礙了有效的消毒。這意味著為了UV光對CO 2培養(yǎng)箱凈化，必須去除所有內(nèi)部組分并單獨(dú)高壓滅菌以進(jìn)行去污。10
有毒化學(xué)品
各種類型的抗微生物化合物可用于清潔二氧化碳培養(yǎng)箱的內(nèi)部，并且已經(jīng)使用不同的化學(xué)品作為消毒劑。一些實(shí)例包括氯蒸氣，過氧化氫蒸氣，甲醛和臭氧。在細(xì)胞培養(yǎng)箱中使用化學(xué)品的問題是難以確定所有痕量的化學(xué)品已被消除，并且可能需要在實(shí)驗(yàn)室中難以實(shí)施的額外的安全預(yù)防措施。實(shí)驗(yàn)證據(jù)表明，甚**非常少量的揮發(fā)性有機(jī)化合物在培養(yǎng)基中高度可溶，并導(dǎo)致細(xì)胞毒性和應(yīng)激蛋白的表達(dá)。11只有在由受過培訓(xùn)的專業(yè)服務(wù)提供者管理時(shí)，才應(yīng)考慮使用這些方法，
結(jié)論
當(dāng)評估控制和消除CO2培養(yǎng)箱中的污染的選項(xiàng)時(shí)，將易于使用和經(jīng)證實(shí)的有效性（具有獨(dú)立數(shù)據(jù)）視為您的主要關(guān)注點(diǎn)之一。**好的方法是需要很少的動手時(shí)間才能有效的方法。連續(xù)污染預(yù)防策略與周期性去污方法和良好的無菌技術(shù)的結(jié)合將確保您寶貴的細(xì)胞繼續(xù)安全地生長，有助于您的研究或生產(chǎn)目標(biāo)。
參考文獻(xiàn)
